薄層色譜定性和定量分析

(一)定性分析

    薄層色譜的定性依據主要是根據待測組分的Rf值和純品的Rf值對照定性。將待測物質與一性質相近的標準物質在同一薄層上點樣，于同一條件下展開、顯色，根據測得的相對Rf值進行確證。如果它們的Rf值一樣，則表示待測組分就是這個純物質。為了考查其定性的準確性，常常將制成的板點樣后，在不同的展開劑中展開，如果所得到的尺f值都一樣，就可靠地證明它們是同一物質。有時為了進一步確證待測物，可將斑點從硅膠上洗脫下來，用其他方法進行定性鑒定。

    (二)定量分析

    1．目視比較法

    取標準物配制系列濃度的試樣，將樣品與標準物試樣在同一薄層板上點樣(點樣體積相同)，展開，顯色后用目視的方法比較樣品斑點和標準斑點面積大小和顏色深淺，取與標樣zui接近的斑點，按標準物質的含量進行定量計算，誤差為±10％。

    2．洗脫法

    洗脫法是將展開后被分離化合物斑點區的吸附劑從薄層板上剝離下來，再用適當的溶劑溶解，提取出被分離的化合物，然后用其他的含量測定方法進行測定。常用的測定方法有分光光度法，其他如譜法、庫侖滴定法、氣相色譜法和液相色譜法等也有應用。

    3．斑點面積測量法

    面積法是根據薄層板上斑點面積與物質濃度的關系，直接進行含量測定的一種方法。實驗結果表明。斑占樣品質量的對數(1gm)與斑點面積的平方根．屑成線性關系．

    (1)稀釋未知樣品法  在同一塊薄層板上，點3個樣品點：標準樣品點，未知濃度樣品點，稀釋到一定倍數的未知樣品點。正常展開顯色后，測量相應斑點面積(相對值)。    

    (2)稀釋標準溶液法  在同一塊薄層板上點3個樣品點：標準樣品點，稀釋到一定倍的標準樣品點，未知濃度樣品點。正常展開顯色后，測量相應的斑點面積(相對值)，優為所求未知物質量。

    斑點面積的測量可采用一張半透明的繪圖紙，覆蓋在薄層上，描出斑點的面積，再將紙移到方格坐標紙上，讀出斑點所占的格數，測量每格的面積(約0.25cm×0.25cm)，即司計算出斑點的總面積。誤差為±5％。

    4．掃描光密度法

    掃描光密度法是直接用儀器在薄層板上測定斑點的顏色深度或熒光強度的一種方法。由于它的分離效率和測定靈敏度高、準確、快速，現已成為薄層定量的主要方法。薄層掃描定量方法可分為吸收測定法和熒光測定法。吸收測定法又可分為透射法和反射法。透射法是使光束照到薄層斑點上，測量透射光強度；反射法是使光束照到薄層斑點上，測量反射光的強度。凡被測組分有熒光或經適當處理后能生成熒光化合物時，均可進行熒光測定。可用氙燈或汞燈作紫外光源，測定時可選擇適宜的激發光和熒光波長。