六通閥的清洗

  1、六通閥的清洗 在INJECT位置，把針孔清洗器（Needle Port Cleaner，Part No.7125－054）套在1ml注射器上，注射器事先吸取1mL流動相，慢推即可清洗六通閥，隨后推一針空氣，把孔道里面的液體吹盡。  實(shí)際上，找個操作是清洗導(dǎo)針孔道，就是六通閥里有孔的塑料管。每次進(jìn)樣時，進(jìn)樣針殘留的樣品溶液會粘附在這個塑料管上，會污染下一次進(jìn)樣，一般幾十針進(jìn)樣后需清洗一次。更換分析樣品時須先清洗。   對于樓主頂層的問題，如果你清洗后沒有把導(dǎo)針孔道的液體吹干的話，液體就會進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中，不過，一般清洗液都是選擇流動相，故不會有太大的危害。先吹干再進(jìn)樣。 定量環(huán)一般不用清洗，因?yàn)槊看芜M(jìn)樣時流動相已經(jīng)在沖洗了。   2、滿環(huán)進(jìn)樣與非滿環(huán)進(jìn)樣    滿環(huán)進(jìn)樣是以超過定量環(huán)體積的量進(jìn)樣，如20uL定量環(huán)滿環(huán)進(jìn)樣可用大于20uL的液體進(jìn)樣，而實(shí)際進(jìn)入HPLC系統(tǒng)的體積就是定量環(huán)的體積（一般用2－5倍定量環(huán)體積進(jìn)樣，6－10倍進(jìn)樣準(zhǔn)確性更佳）。   非滿環(huán)進(jìn)樣是以小于定量環(huán)體積的量進(jìn)樣，一般不超過定量環(huán)體積的一半（層流效應(yīng)，流體中心流速大于管壁流體的流速）。20uL定量環(huán)采用非滿環(huán)進(jìn)樣應(yīng)小于10uL。進(jìn)樣體積從進(jìn)樣器上讀出。樣品較少時可以用非滿環(huán)進(jìn)樣方式進(jìn)樣。    3、關(guān)于進(jìn)樣量  進(jìn)樣量是進(jìn)入HPLC系統(tǒng)的樣品的質(zhì)量或物質(zhì)的量。滿環(huán)進(jìn)樣時常以濃度表示（體積一定），進(jìn)樣濃度一樣時可以進(jìn)樣體積表示（濃度一定）。統(tǒng)一換算成質(zhì)量或物質(zhì)的量。   從以往的帖子看，樓主在做多糖的SEC，生物高分子的溶液粘度大，不可能配制很高濃度的溶液，一般以稀溶液進(jìn)行分析。此時，進(jìn)樣體積的多少對分析的結(jié)果會存在一定影響（如峰擴(kuò)展和柱過載）。鑒于此，應(yīng)對進(jìn)樣的體積進(jìn)行試驗(yàn)，選擇對結(jié)果影響較小的體積（范圍）進(jìn)樣。    對一般HPLC的定量分析而言，較少研究進(jìn)樣體積的影響（此時，進(jìn)樣量遠(yuǎn)小于柱的zui大容量），而制備色譜中此問題則需要考慮。